人體身高的決定性因素是生長激素,生長激素 的分泌主要與睡眠,尤 其 是 慢 波 睡 眠 ( slow wave sleep,SWS) 有關。酸棗仁是養心安神中藥,藥食 同源之上品,是治療各種失眠的常用中藥。酸棗 仁所含的化學成分主要有皂苷類、黃酮類、生物堿 類、三萜類、甾體類、脂肪酸類、揮發油類等。研 究表明,酸棗仁皂苷具有鎮靜催眠作用,但是,酸 棗仁及其所含的化學成分是否可以促進身體增高, 尚未見文獻報道。筆者前期研究發現,酸棗仁所含 的主要活性成分酸棗仁皂苷 A 具有促進慢波睡眠, 促進動物體內生長激素分泌及促進小白鼠骨骼增長 的作用。
SD 大白鼠 48 只,雌雄各半,SPF 級, 體質量( 220 ± 20) g,動物許可證號: SCXK( 豫) 2015- 0001。昆明種健康小白鼠 30 只( 來自同一時期每胎 3 只共10 胎) ,SPF 級,雄性,1 月齡,體質量( 16 ± 1) g,動物許可證號: SCXK( 豫) 2010-0002。同購于河 南省實驗動物中心。動物喂養環境: 溫度( 22 ± 2) ℃,濕度( 60 ± 10) % ,7∶00 - 19∶00 光照,噪音 < 50 dB。實驗中對實驗動物的處置符合科技部頒布 的《關于善待實驗動物指導性意見》中的相關規定。
酸棗仁提取物( 含酸棗仁總 皂苷 5% ,批號: 17-0523) ,購于陜西斯諾特生物技 術有限公司,酸棗仁皂苷 A 標準品( 批號: 110734- 120106,純度 > 98% ) 購于中國食品藥品檢定研究 院; 小白鼠生長激素 ELISA 試劑盒( 上海紀寧實業 有限公司,批號: 201511) ; 小白鼠 5-羥色胺受體蛋 白 1A ( 5-hydroxytryptamine 1A receptor,5-HT1AR) ELISA 試 劑 盒 ( 上海紀寧實業有限公司,批 號: 201510) ; 磷酸酶抑制劑( 上海碧云天生物技術有限 公司,批號: S1873) ; RIPA 細胞裂解液( 上海碧云天 生物技術有限公司,批號: P0013B) ; 胞漿胞核蛋白提取試劑盒( 南京凱基生物技術有限公司,批號: KGP150) ; BCA 蛋白濃度測定試劑盒( 上海碧云天 生物技術有限公司,批號: P0010) ; TEMED ( Amresco,批 號: Amresc00761 ) ; 蛋 白 marker ( 14-120KD) ( 北京全式金生物技術有限公司,批號: DM111) ; PVDF 膜 ( Millipore,批 號: IPVH00010 ) ; 兔 多 抗 5- HT1AR( Bioss,批號: Bs-1124r) ; 兔多抗 GAPDH( 杭 州賢至生物有限公司,批號: AB-P-R 001) ; HRP 標 記羊抗兔二抗( 武漢博士德生物工程有限公司,批 號: BA1054) 。
酶標儀( Labsystems Multiskan MS,芬 蘭,352 型) ; 離心機( 湖南湘儀實驗室儀器開發有限公司,型號 HI650) ; 電轉儀( 北京六一儀器廠,型號 DYCZ-40) ; 垂直電泳槽( 北京六一儀器廠,型號 DYCZ-24DN) ; 水平搖床( 江蘇海門其林貝爾儀器制造有限公司,型號 TS-1) ; 磁力攪拌器( 江蘇省金壇市 中大儀器廠,型號 T8-1) 。
將 30 只小白鼠隨機分為 3 組, 每組 10 只,即對照組、酸棗仁提取物組、酸棗仁皂苷 A 組。48 只大白鼠隨機分為 3 組,每組 16 只,即對 照組、酸棗仁提取物組、酸棗仁皂苷 A 組。實驗動 物適應環境 7 d 后開始灌胃給藥。
酸棗仁提取物大白鼠按 0. 220 mg·g - 1 體質量灌胃給藥,小白鼠按 0. 320 mg·g - 1 體質量灌胃給藥; 酸棗仁皂苷 A 大白鼠按 0. 011 mg·g - 1 體質量灌胃給藥,小白鼠按 0. 016 mg·g - 1 體質量灌胃給藥。實驗藥物用蒸餾水溶 解,酸棗仁提取物混懸液,酸棗仁皂苷 A 水溶液。 實驗動物每日灌胃給藥 1 次。對照組使用蒸餾水灌 胃。
分組后第 1 次測量原始 體長,3 組小白鼠原始體長比較無顯著差異( P > 0. 05) 。實驗用藥 20 d 后麻醉動物,放在臺面上,將 身體拉直,用直尺測定體長,從頭頂端到小白鼠臀尾 交接處即為小白鼠體長,精確到 1 mm。
使用小米手環 3 進行睡眠測定,大白鼠以 體積分數 7% 水合氯醛( 3. 3 mL·kg - 1 ) 腹腔注射麻 醉,將小米手環 3 用透明膠帶固定于大白鼠頸部,每 1 個手環關聯 1 部包含有小米運動軟件的智能手 機。給藥后,在光照情況下,人員撤離,保持安靜的 環境,記錄大白鼠睡眠狀況。6 h 后取下小米手環3,通過相關聯的手機查詢大白鼠各睡眠時相的時 間。然后眼眶采血,室溫下血液自然凝固 20 min,離 心半徑 10 cm,3 000 r·min - 1 ,離心 20 min,收集上 清液,采用 ELISA 試劑盒測定血清 GH 水平。取一 半大白鼠腦組織,加入 PBS 冰浴中勻漿,離心,收集 上清液,ELISA 法檢測腦組織 5-HT1AR 活性。
灌胃 20 d 后酸棗仁提取物組、酸棗仁皂苷 A 組體長明顯優于 對照組,差異有統計學意義( P < 0. 01) ,酸棗仁提取 物組和酸棗仁皂苷 A 組比較,差異無統計學意義, 說明酸棗仁提取物和酸棗仁皂苷 A 都可以明顯增 加生長發育期小白鼠的體長,兩者作用相當。見表 1。酸棗仁皂苷 A 可以促進大白鼠慢波睡眠時間( P < 0. 05) ,酸棗 仁提取物也可以明顯促進大白鼠慢波睡眠,與對照 組比較,差異有統計學意義( P < 0. 01) ,說明藥物可 以延長慢波睡眠。而兩組對異相睡眠( paradoxical sleep,PS) 期無影響。由于藥物促進了慢波睡眠,所 以用藥組較對照組總睡眠時間明顯延長,清醒時間 減少,而酸棗仁提取物和酸棗仁皂苷 A 比較,促進 慢波睡眠作用相當。見表 2。
酸棗仁 提取物及酸棗仁皂苷 A 可以明顯促進大白鼠體內 GH 的分泌,體現在兩組血清中 GH 明顯高于對照組 ( P < 0. 01) ,說明慢波睡眠時間的延長促進 GH 分 泌增多,這與文獻報道相符。酸棗仁提取物組大白鼠腦組織 5-HT1AR 活性明 顯高于對照組( P < 0. 01) ,而酸棗仁皂苷 A 組的 5- HT1AR 活性較對照組也有一定的增高( P < 0. 05) 。、
酸棗仁提取物和酸棗仁皂苷 A 都可以促進小 白鼠骨骼增長,其機制可能是提高腦組織 5-HT1AR 蛋白的表達,促進腦組織 5-HT1AR 的活性,從而引 起慢波睡眠的延長,進而促進生長激素的分泌。經 統計學分析,酸棗仁提取物作用更好,但兩者沒有統 計學差異。酸棗仁提取物含酸棗仁皂苷 A 單體相 當量,所以除了酸棗仁皂苷 A 外還含有其他成分, 如黃酮類、生物堿類、三萜類、甾體類、脂肪酸類、揮 發油類等。有文獻報道,酸棗仁中黃酮苷類物 質斯皮諾素能通過 5-HT 系統的調節來發揮鎮靜催 眠作用。另有文獻報道,酸棗仁總皂苷可明顯抑 制小白鼠自發活動,促進睡眠,協同戊巴比妥鈉的中 樞抑制作用,拮抗苯丙胺的中樞興奮作用,其中樞抑 制作用呈一定的劑量依賴性。酸棗仁總黃酮 也能減少小白鼠自發活動,其中樞抑制作用也呈劑 量依賴性。所以,除了酸棗仁皂苷,黃酮類也發 揮著促進動物增高的作用。這可能就是酸棗仁提取 物具有很好的促進慢波睡眠從而促進骨骼發育的作 用原理。
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