1 材料與方法
主要儀器設(shè)備:UV-2600紫外可見(jiàn)分光光度計(jì) [島津企業(yè)管理(中國(guó))有限公司]、Moshot MSX2型 倒置顯微鏡(廣州市明美光電技術(shù)有限公司)、Infinite M200型酶聯(lián)檢測(cè)儀(瑞士TECAN公司)、CO2培 養(yǎng)箱(美國(guó)Thermo Fisher Scientific公司)、Agilent 6890N型氣相色譜儀(美國(guó)Agilent公司)、GL-3250C 型磁力攪拌器(海門市其林貝爾儀器制造有限公 司)和移液器(德國(guó)Eppendorf公司)。
2 結(jié)果與分析
將載體蛋白BSA、OVA、合成半抗原及偶聯(lián)產(chǎn) 物分別用PBS緩沖液調(diào)整濃度至1.0 mg/mL后,進(jìn)行 紫外吸收光譜掃描。對(duì)硫磷合成半抗原 Hapten-PA、BSA和OVA的最大吸收峰分別在283、 285和286 nm處;免疫抗原PA -BSA、包被抗原PA - OVA的吸收曲線與相應(yīng)的半抗原及載體蛋白相比, 均發(fā)生明顯改變;PA-BSA和PA-OVA與各自載體蛋 白相比,在283~286 nm最大吸收峰的吸光值明顯不 同,表明人工抗原合成成功。在融合前4 d進(jìn)行小鼠血清效價(jià)與抑制率檢測(cè), 篩選效價(jià)高、抑制好的小鼠加強(qiáng)免疫。 融合小鼠的血清效價(jià)為8×103 ,當(dāng)包被抗原PA-OVA (1.0 mg/mL)按1∶2000稀釋、血清按1∶4000稀釋時(shí), 該融合小鼠血清對(duì)100 ng/mL對(duì)硫磷的抑制效率可 達(dá)50%,因此選擇該稀釋濃度下的抗原抗體組合進(jìn) 行后續(xù)細(xì)胞篩選。
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